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天正10年3月2日（1582年3月25日）
信濃國伊那郡高遠（現·長野縣伊那市高遠町）
勢力
織田軍
武田軍（高遠城守備隊）
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天正10年（1582年）2月，木曾谷的國眾木曾義昌脫離武田家、轉而投向織田方，織田信長以此為契機，與同盟者德川家康、北條氏政一同，對自長篠之戰以來勢力急速衰退的武田勝賴之領國——甲斐、信濃、駿河、上野——發動總攻擊。此即世稱的甲州征伐。信長將率領伊那口本隊的指揮權交給嫡男織田信忠，家康從駿河口、北條氏政從關東，分別侵入武田領。武田方的諸城自木曾義昌離反起便接連離反、開城，進入信濃的信忠軍幾乎未遭抵抗，即逐一攻略各地的城池。木曾谷至伊那谷一帶的國眾如雪崩般紛紛轉向織田方，3月1日，信忠軍終於包圍了信濃國伊那郡的要衝高遠城。高遠城是武田家守衛伊那谷的最後防線，此城的攻防事實上成為宣告名門武田氏滅亡倒數計時的一戰。
高遠城城主仁科盛信據傳為武田信玄之第五子，是勝賴的異母弟。高遠城原為諏訪氏分支高遠氏的居城，天文14年（1545年）信玄擊破高遠賴繼，將其納入武田領，此後作為掌控伊那谷的要地加以整備。此座平山城築於三峰川與藤澤川所環繞的河岸段丘之上，以斷崖為天然險要，構造堅固。天正9年（1581年），勝賴在織田、德川壓力日益加劇之際，派盛信守衛此城，作為伊那谷防衛的要害。織田信忠在進攻之前，派遣當地僧侶為使者，將黃金與勸降書函送入城中，但盛信斷然拒絕，據傳還削去使者的耳與鼻後送還。在周邊諸城如雪崩般向織田方投降、開城之際，此舉顯示了盛信堅持貫徹武田家意氣到底的決心。勝賴本隊此時已退往新府城，高遠城並無援軍可望。即便如此，盛信仍與家臣小山田昌成、小山田大學助等人，以不滿3000之兵選擇了徹底抗戰。當時身為武田家重臣的穴山信君（梅雪）也已暗中與德川方通謀並離反，盛信的籠城，在家臣團相繼背棄主家之中成為少數的例外。
3月2日，織田大軍——僅信忠本隊就有3萬餘人，甲州征伐全體據傳兵力超過5萬——對高遠城發動總攻擊。城兵在兵力懸殊之中激烈抗戰，一度據說對織田方造成相當損傷，但寡不敵眾，僅一日的攻防，城便陷落。仁科盛信奮戰後切腹自盡，享年26。小山田昌成、小山田大學助為首，約500名家臣殉主。盛信的首級送至信忠處，之後據傳由長谷川宗仁之手，與武田勝賴、信勝父子等人的首級一同，在京都一條通的路口示眾。高遠城落城僅9日之後，勝賴於天目山自刃，甲斐源氏的名門武田氏於此滅亡。高遠城的激戰被後世傳頌為武田家最後的組織性抵抗，在周邊諸城相繼無血開城之際，它是唯一貫徹「竭盡死力的籠城戰」的事例，江戶時期的軍記物語等亦屢屢提及。考量到武田家臣相繼離反的背景，盛信的徹底抗戰既是一族意氣的最後抵抗，同時也凸顯出戰國大名武田氏的統治體制早已從內部崩解的事實。對信忠而言，此役亦成為重大軍功，作為確定甲州征伐中織田軍勝利的戰果，向信長報告。
武田氏滅亡後，高遠城在經歷天正壬午之亂後，由德川方的保科正直入城。江戶時代，此城成為高遠藩的藩廳，後來保科正之成為藩主。正之為三代將軍德川家光的異母弟，以由高遠藩主經山形藩主而就任會津藩主的名君而著稱。現今，於城跡附近的伊那市立高遠町歷史博物館，以主題分類介紹高遠城與城下町高遠的歷史，展示有明珍的頭盔、高遠藩主內藤家的甲冑等。
高遠城的攻防戰，亦詳載於信長右筆太田牛一所著的第一手史料《信長公記》之中。該書詳細記錄甲州征伐的全過程，是傳達3萬大軍總攻擊的情景、城兵的奮戰，以及落城後盛信的首級送達信長處之經過的珍貴史料。江戶時期以後，高遠城之戰亦作為彰顯武田家臣忠義的軼事，在軍記物語與講談中反覆被講述，仁科盛信之名也廣為人知，成為「為主家殉死的武將」的代表人物。
甲州征伐是僅約一個月左右的短期間內，制壓甲斐、信濃、駿河、上野武田領國的閃電式軍事行動。曾歷經信玄、勝賴二代，於東國誇示首屈一指軍事力量的武田家，之所以在如此短期間內瓦解，背後有長篠之戰中騎馬軍團的覆滅、勝賴求心力的下降，以及家臣團相繼離反等複合因素。高遠城之戰是在這場閃電式征服戰中，幾乎唯一有組織且激烈抵抗的戰鬥，就此意義而言，也是武田家軍事力量直到最後仍保有一定戰鬥力的事例。對信長而言，完成甲州征伐，排除了東國最大的威脅，並使天下統一事業大幅前進，成為具有劃時代意義的勝利。關於進攻高遠城的兵力，史料說法不一：有認為信忠本隊約3萬者，也有認為甲州征伐全體總兵力為5萬至近10萬者，說法各異。無論如何，與仁科盛信所率不滿3000之兵相比，差距懸殊，正是此一兵力差距，將盛信的抗戰導向悲壯的玉碎之局。
高遠城之戰，不僅止於一城的攻防，還具有歷史上的深刻意義。它宣告了被譽為戰國最強的武田軍團的終結，同時也是武士竭盡死力、以城為枕而戰死的戰國武士道之一大極致的戰役。周邊諸城相繼無血開城之際，唯獨高遠城貫徹徹底抗戰，使其在後世武士眼中成為「對主家的忠義」之理想典範而被傳頌。今日，高遠城址被指定為國家史跡，並以「天下第一櫻」之名，作為櫻花名勝廣為全國所知。每年4月初，約1500株小彼岸櫻染紅石垣的景象，吸引眾多賞櫻客前來，而流傳著高遠城跡的櫻花比其他櫻花顏色更深，是因為吸收了這場戰役中戰死士兵的血。春光爛漫的櫻雲之下長眠的，是為主家殉死武士們的記憶，高遠之地至今仍將武田家最後的意氣傳承於今日。